免疫組化
應用免疫學基本原理,通過標記的特異性抗體(或抗原)對組織內抗原(或抗體)的分別進行組織和細胞原位檢測,從而進 行定位、定性及相對定量的研究。
實驗意義
1.免疫組織化學可應用于惡性腫瘤的病理診斷和科研工作。
2.可與組織化學染色方法的形態學診斷相結合,提高疑難腫瘤的鑒別診斷的準確率,并為腫瘤進行進一步的病理分型。
3.指導和提供臨床治療方案的選擇。
實驗步驟
1.石蠟切片免疫組化:
①67℃烘箱烘片2小時,常規脫蠟至水,用pH 7.4的PBS沖洗三次,每次3 min; ②將切片置于沸騰的檸檬酸鹽緩沖液中中檔微波處理10 min,蒸餾水沖洗三次,PBS沖洗三次,每次3 min;
③3%H2O2室溫孵育10 min阻斷內源性過氧化物酶的活性,PBS沖洗三次,每次3 min;
④5~10%正常山羊血清(PBS稀釋)封閉,室溫孵育10 min,吸去血清后滴加稀釋至適當比例的一抗,37℃孵育1-2 h或者 4℃孵育過夜;
⑤PBS沖洗三次,每次3 min;⑤滴加稀釋至適當比例的帶標記二抗,37℃孵育10~30 min,PBS沖洗三次,每次3 min;
⑥滴加適當比例稀釋的辣根酶標記物工作液,37℃孵育10~30 min,PBS沖洗三次,每次3 min;
⑦顯色劑顯色,自來水充分沖洗,復染細胞核,酒精脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。
2.冰凍切片免疫組化:
①新鮮組織立即在恒冷冰凍切片機內切片,厚度為5~6 μm;
②載玻片可不打底,裱片后立刻用電吹風吹干;
③染色前需用冷丙.酮4℃固定10~20 min;
④PBS洗2次,每次5 min;
⑤3%H2O2滅活內源性過氧化物酶20 min,需避光處理;
⑥后續血清封閉與抗體孵育步驟與石蠟切片相似,最后脫水透明封片進行觀察。
結果展示:
石蠟切片免疫組化
冰凍切片免疫組化
實驗完成周期及交付標準
1.實驗周期:1-2周
2.交付標準:蠟塊、切片、熒光圖片、半定量分析、實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)
需確認的信息
1.是做石蠟切片還是冰凍切片(推薦做石蠟切片)
2.樣本的種屬和類型,是組織還是細胞?
3.樣本的數量
4.是否提供一抗,我方可代購
5.半定量分析要求
6.拍照要求
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電咨詢!
做實驗,找碩璽!您的科研生涯,我們一路相伴!
【平臺項目開展范圍】慢病毒,腺病毒,RNAi類,分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動 物實驗,蛋白組學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導、SCI、核 心期刊等服務。
【碩璽生物】已開展了數千個實驗外包項目。我們專注于醫學課題研究,已從課題申請、方案設計、試劑 采購、模型構造、標本檢測、數據分析、以及對SCI撰寫與發表的支持,各個環節積累了數千個成功案例 經驗,為數千個來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關實驗服務信息請咨詢碩璽生物。